· PoliakryloamidŻel musi przez monomer akryloamidowy, materiał początkowy polimeryzacji, katalizator i prawo do mieszaniny soli i bufora.
· akryloamida bis (n, n '- podwójny akryloamid metylenowy) to macierz żelowa formy monomeru.
· Persulfate persulfate amonu Rozpocznij proces polimeryzacji adhezyjnej. Preparat kleju wymaga 10% roztworu persulfate amonu przygotowanego w wodzie. Większość informacji wskazywała na potrzebę aktywnego użytkowania. Jednak 10% roztworu można umieścić na 4 ℃ przez kilka tygodni bez znaczącej utraty aktywności. Stwórz do 10 ml i odrzuć, gdy klej nie będzie się agregować.
Wskazówka: odsetekakryloamidW sekwencjonowaniu kleju i kleju białkowego nie są takie same. Jeśli używasz Premade Acrylamid: BIS Solution, pamiętaj o odpowiedniej butelce.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametylo etylenodiamina) jest katalizatorem w brązowej butelce umieszczonej w lodówce. Dodaj tuż przed nalaniem kleju.
· Elektroforeza poliakryloamidowa Zastosowana szkło w elektroforezy należy myć przed i po za każdym razem. Po elektroforezie umyj miękką szczotką i szmatką w gorącej wodzie z mydłem, spłucz wodą destylowaną i stań do wyschnięcia.
· Wilgoć i kurz mogą powodować pusty polimer. Przed elektroforezą wyczyść szklaną talerz za pomocą szklanego środka do czyszczenia i wytrzyj ją miękką szczotką. Umyj wodą destylowaną i dokładnie wysusz za pomocą papierowego ściereczki. Płukanie z 70% etanolem przed wycieraniem papieru pomaga wyczyścić i przyspieszyć suszenie. Dodaj próbki akryloamidu sukcesywnie: BIS, woda, roztwór buforowy, persulfate amonu, Temed. Dobrze wstrząśnij i natychmiast wlej.
Przed polimeryzacją nie jest konieczne, aby odgazować poliakryloamid. (Akryloamid był umieszczony w próżni w celu usunięcia pęcherzyków, ponieważ tlen hamuje polimeryzację.)
Poziome wskazówki dotyczące punktu kleju.
· Włóż kawałek czarnego papieru w dolnym pudełku, czarne tło, aby zrobić trochę dziury, aby wyraźniej zobaczyć.
· Bufor wypełniony zbiornikiem kleju, tuż nad koloidem.
· Jeśli krawędź ma światło, włącz światła, niech światło świeci koloidem. Narysuj próbkę do pipety.
· Korzystanie z automatycznego urządzenia do pipetowania.
· W 10-200 MU 1 PUNKT PRZEJŚCIOWY MOŻLIWOŚCI MOŻE być stosowany w większości punktów na próbce. W przypadku bardzo małych otworów próbki (mniej niż 10 μ1) długa głowica pipety używana do sekwencjonowania kleju jest wygodniejsza.
· Pipetowanie właśnie zanurzone w próbce, wdychając powoli poruszając płyn. Próbka może wydawać się lepka z gliceryną, a szybkie pompowanie może wciągnąć pęcherzyki powietrza do głowicy pipety.
· Próbki po wdychaniu głowicy pipetowej delikatnie poruszają płynną głowę na krawędzi rury lub papieru do wycierania płynnej głowicy na zewnątrz kropel. Uważaj, aby nie ssać próbki.
Umieść próbkę w otworze próbki
· Urządzenie do pipetowania, aby utrzymać niewielki ciśnienie, spraw, aby próbki lekko przesunąć płynną głowicę przepełnienia.
· Głowica pipetowania włożona do bufora, nieco wyższa niż otwory punktowe, utrzymują ciśnienie dodatnie. Czubek pipety można włożyć do małego otworu.
· Powoli i stopniowo próbki. Końcówka pipety jest umieszczona nad otworem próbki punktu, a próbka zatopi się w otworze. Niech próbka zatopi się, aby wypełnić otwór próbki zamiast wcisnąć.
Lika
Jak zrobić pobieranie próbek kleju pionowego?
· Pionowe otwory próbki punktu kleju utworzone między dwoma kawałkami szkła. W bardzo cienkim kleju nie można nawet włożyć do dwóch szklanych płyt. Obejrzyj glicerynę! Połóż głowicę pipety nad otworem próbki, a próbka zatopi się w otworze.
· Wcześniej próbka punktowa, pamiętaj, aby umieścić pionowy punkt polipropylenowego otworu próbki żelu acylowego jest czyste. Zmyć niezapolimeryzowany akryloamid i wodę, która może pojawić się na dole otworu próbki. Woda może znacznie zmniejszyć dziurę próbki. Użyj strzykawki 25 ml lub 50 ml i igły o grubości 18. Wlej bufor elektroforezy i ostrożnie spłucz otwór próbki.
· Może być trudno zobaczyć dziurę próbki, ale jednocześnie reszta jest łatwa. Jeśli występują nadmiar otworów, bufor próbki można przetestować za pomocą niebieskiego bromofenolu.
Czas po: Mar-31-2023